作者
Ángeles Arzalluz Luque
简介
Las glutarredoxinas son proteínas que se encuadran en la familia de las redoxinas, y que tenen un importante papel en el mantenimiento de la homeostasis redox, especialmente por su capacidad de revertr la oxidación de los residuos de cisteína de las proteínas, manteniendo su estructura y función e impidiendo su degradación. Existen en distnto número, localización celular y funciones según el organismo. Este trabajo se centra en la glutarredoxina 2 (GRX2) deSaccharomyces cerevisiae, que posee una localización dual, mitocondrial y citosólica, gracias a la existencia de un primer fragmento que actúa como péptdo señal de importación mitocondrial. La GRX2 tene un papel importante en la eliminación de EROs, la protección de proteínas frente al estrés oxidatvo y la regulación de distntas rutas metabólicas. Se ha llevado a cabo con éxito la clonación del gen grx2 sin el péptdo señal a partr de DNA genómico de una estrpe silvestre de S. cerevisiae, empleando cebadores diseñados para este fin, y su inserción en el vector pET100/D-TOPO. Este vector se ha utlizado para la expresión de la proteína recombinante en células BL21 (D3) de Escherichia coli, donde ha sido inducida con IPTG para la obtención de grandes cantdades de la misma. La proteína se ha purificado en una columna cromatográfica TALON® mediante una resina de afinidad, a la cual se adhiere la cola poli-His de la proteína recombinante. Ésta fue cortada con trombina al final de la purificación. Las distntas etapas de purificación se han analizado y caracterizado mediante determinación de proteína, electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones …