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O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do horário de colheita e do beneficiamento das folhas no teor e na composição química do óleo essencial de melissa (Melissa officinalis L.) cultivada em estufa agrícola e campo. O ensaio foi conduzido na Fazenda Experimental “Campus Rural da UFS”, localizado em São Cristóvão-SE, utilizando-se mulch preto como cobertura morta, em canteiros dimensionados em 1, 20 m de largura. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2 x 2 no primeiro ensaio (em estufa agrícola) e 4 x 2 no segundo ensaio (em campo), com seis repetições. Os tratamentos do primeiro ensaio foram: dois horários de colheita (9 e 15h) e a secagem das folhas (frescas e secas a 40 C). No segundo ensaio testaram-se quatro horários de colheita (8, 11, 14 e 17h) e a secagem das folhas (frescas e secas a 40 C). Cada repetição constou de quatro plantas. As plantas foram escolhidas aleatoriamente por ocasião do corte, três meses após o transplantio. A secagem a 40oC das folhas de M. officinalis, cultivada em estufa agrícola, resultou em óleo essencial com traços de nerol e gerianol. O horário de colheita e a secagem das folhas de M. officinalis influenciaram na composição química do óleo essencial. Maior teor de óleo essencial de M. officinalis em cultivo de campo foi obtido de folhas frescas colhidas às 17 h.