Penelitian ini mengembangkan bahan ajar berupa petunjuk praktikum fisiologi tumbuhan berbasis multimedia autoplay. Tidak hanya teori atau materi yang diinovasikan menjadi media pembelajaran menarik, tetapi petunjuk-petunjuk praktikum juga perlu untuk dikembangkan dalam bentuk media pembelajaran agar dapat menarik perhatian peserta didik. Metode penelitian dan pengembangan atau Research and Development (R&D) dengan model pengembangan ADDIE merupakan salah satu metode yang digunakan dalam dunia pendidikan untuk menghasilkan produk sesuai dengan kebutuhan peserta didik. Berdasarkan hasil penelitian bahwa pengembangan petunjuk praktikum fisiologi tumbuhan berbasis multimedia autoplay layak dijadikan sebagai salah satu inovasi baru dalam proses pembelajaran. Hal ini sesuai dengan hasil validasi para ahli berskala (1-4) menunjukkan bahwa hasil validasi materi memperoleh persentase kelayakan sebesar 89, 7% dan validasi media memperoleh persentase kelayakan sebesar 73, 4%.