Penelitian ini bertujuan mengetahui jenis bakteri Gram negatif pada uterus sapi Aceh yang mengalami kawin berulang. Dalam penelitian ini digunakan enam ekor sapi Aceh betina yang terdiri atas tiga ekor sapi fertil (K1) dan tiga ekor yang mengalami kawin berulang (K2, repeat breeding, RB). Pengambilan sampel bakteri dalam uterus sapi dilakukan dengan menggunakan swab steril yang disimpan dalam media nutrient broth (NB) untuk isolasi dan identifikasi jenis bakterinya. Berdasarkan hasil penelitian, baik K1 dan K2, positif terinfeksi bakteri dan diperoleh 16 isolat bakteri di antaranya enam isolat berasal dari K1 dan sepuluh isolat berasal dari K2. Dari 10 isolat bakteri Gram negatif yang ditemukan pada sapi RB terdiri atas Escherichia coli (E. coli)(30, 00%), Pseudomonas sp.(30, 00%), Enterobacter sp.(20, 00%), Klebsiella sp.(20, 00%). Disimpulkan bahwa bakteri yang paling banyak menginfeksi uterus sapi RB adalah E. coli dan Pseudomonas sp.